二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体，上面通常连有酶、荧光素或生物素等耦联标记。二抗针对某一特定物种（如小鼠）的所有抗体（如IgG、IgM或IgA等）均具有反应性，因而使用标记的二抗可以免去对每个一抗进行标记，大大节省了时间和费用；此外，一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子，从而使信号大大增强，提高了实验灵敏度。通常情况下，某一特定的实验中可能同时有几种二抗可供选择，如何能选择到最适合该实验的二抗，需要综合以下几个方面进行考虑：

 

      

 

    全IgG形式的二抗是从抗血清中分离出来的完整的分子；这些抗体有一个Fc部分和两个与抗原结合的Fab部分，因此是二价的，也是性价比最高的。 F(ab’)2片段形式的二抗是用胃蛋白酶消化IgG去除Fc部分，剩下两个靠二硫键连接的结合抗原的Fab部分，依然是二价的；该抗体可避免与Protein A /G或与Fc受体的结合， 还由于其分子本身比较好，更容易渗透入细胞组织结构内而灵敏度更高 。Fab片段形式的二抗是用木瓜蛋白酶消化IgG后得到的；Fab片段抗体由于只含有一个结合位点，可用来封闭内源性的免疫球蛋白。

 

2.     根据一抗的种属来源和类型选择二抗

 

        二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果一抗是小鼠源的抗体，二抗则选抗小鼠的二抗；如果一抗是从兔血清里制备的兔源抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。另外，二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。如果一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗。至于二抗本身是在什么动物中制备的对二抗的质量并无明显的影响。艾美捷科技能为您提供最全种属的二抗产品。

 

3.     根据实验要求的特异性进一步筛选二抗

        Anti-IgG (H+L)是最常用也是性价比最高的二抗形式，这类抗体和IgG分子的重链和轻链都可以反应，也可以和其他的免疫球蛋白家族（IgM，IgA，IgD,IgE）和亚家族反应，因为所有的免疫球蛋白都有相同的轻链。 Anti-IgG，Fc fragment specific这类抗体和IgG重链的Fc部分反应，与F(ab’)2或Fab无交叉反应，但可能与IgM或IgA有交叉反应；而抗IgG，Fcγ fragment specific则只与IgG重链反应，通常不能和IgA或IgM任何表位反应。 Anti-IgG，F(ab’)2 fragment specific则与Anti-IgG，Fc fragment specific则正好相反。

      

         另外，与一个物种反应的二抗可能与其他物种发生交叉反应，除非这类抗体经过其他物种的血清蛋白吸附实验。如Jackson 的Horseradish Peroxidase-conjugated AffiniPure Mouse Anti-Goat IgG (H+L) (min X Ms, Hu, Rb Sr Prot) 小鼠抗山羊二抗，就是经过了小鼠、人、兔血清的吸附， 其与小鼠、人、兔血清内蛋白（包括免疫球蛋白）的交叉反应降到最低。 当其他物种免疫球蛋白的出现可能导致交叉反应时，推荐使用这类抗体。

 

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