什么情况下会选择标签抗体用于免疫沉淀呢？

 

       当某些目标蛋白没有对应的特异性抗体（eg.抗体所识别的抗原表位被相互作用蛋白所遮蔽，无法与目的蛋白相互作用或抗体选择不合适，所选抗体不能识别处于天然构象的蛋白）而无法进行免疫沉淀时，可以采用一个表位标记蛋白后，再选择针对此表位的标签抗体来进行免疫沉淀。

 

 

       什么样的标签适合用于免疫沉淀呢？

 

 

       His标签是由6个组氨酸(His-His-His-His-His-His)组成的短肽,专门设计用于重组蛋白质的吸附纯化。由于分子量较小，并且较容易分离和纯化，His-tag 融合标签与其他标签相比有很多明显优势, 是目前用于纯化的融合标签中使用最为广泛的一种。His抗体也常用于检测和His标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测His融合表达蛋白等。  

 

 

 

       为什么推荐使用His标签抗体偶联的琼脂糖/磁珠？

 

 

       与使用Protein A/G琼脂糖的传统免疫沉淀（IP）方法相比，Abbkine的琼脂糖/磁珠偶联标签抗体，省去了Protein A/G与抗原-抗体复合物结合的步骤。偶联抗体直接和目标蛋白结合后，通过离心或使用磁力架，将目标蛋白从细胞裂解液中分离出来。不仅让实验变得简单快捷，更可以避免非特异性结合，降低背景。表位标记蛋白的免疫沉淀可用于确定蛋白的细胞定位、研究翻译后修饰或检测标记蛋白与其它蛋白之间的相互作用。  

 

•        看到这里，您肯定会问，Protein A/G的缺点是什么？

 

1.        1.耗时：使用Protein A/G需要额外的孵育与洗涤操作
2.        2.效果差：当抗体种属、亚型和ProteinA/G不匹配时，ProteinA/G和抗体结合能力弱
3.        3.背景高：和样本中的其他免疫球蛋白结合，产生非特异性结合，导致高背景。  

 

       这就是艾美捷科技为您推荐琼脂糖/磁珠偶联His标签抗体的原因：

 

       琼脂糖/磁珠偶联His标签抗体，优势更加突出：  

 

•        高特异性—高特异性单克隆标签抗体可实现高产量和高纯度免疫沉淀
•        低背景—稳定、预封闭的填料及特异性抗体减少了免疫沉淀过程中的非特异性结合
•        规格灵活：100ul, 400ul, 2ml，多规格可供选择。满足不同规模的免疫沉淀需求
•        操作方便—产品说明书提供了免疫沉淀优化方案，一次免疫沉淀时间约1 - 2小时
•        兼容性强—填料可以兼容手动及自动化操作

 

        琼脂糖/磁珠偶联His标签抗体使用说明：

 

•        * 琼脂糖微球是多孔的，这使得它们具有高的表面积与蛋白质相互接触，并可以容纳大量的液体。在纯化大量蛋白的时候，传统的琼脂糖微球偶联抗体是IP实验的完美选择。（琼脂糖：每个样品加入20ul悬液）
•        * 在IP实验中，由于所有的相互作用均发生在磁珠的外表面，并且磁珠的尺寸更均一，所以磁珠的可重复性和纯度通常高于琼脂糖。磁性分离不需要离心和多次洗涤，且孵育时间短，在日常小规模、快速处理多个样品的IP实验时，磁珠偶联抗体更简单、更快速。（磁珠：每个样品加入10-20ul悬液）
•        * 提供形式：液体（抗体-琼脂糖/磁珠复合物：保护液=1:1，50%的悬浮液）
•        *  储存方式：4°C可保存一年，琼脂糖偶联标签抗体避免冻融和涡旋；磁珠偶联标签抗体避免冻融和离心

 

       琼脂糖/磁珠偶联His标签抗体说明书：

 

       琼脂糖偶联His标签抗体：https://www.abbkine.com/datasheet/A02050AGB.pdf

       磁珠偶联His标签抗体： https://www.abbkine.com/datasheet/A02050MGB.pdf

 

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